维生素C-悬滴法诱导小鼠胚胎干细胞分化为心肌细胞

作者：穆军升; 李献帅; 袁树民; **群; 伯平

来源：中华实验外科杂志, 2014, 31(08): 1665-1667.

DOI：10.3760/cma.j.issn.1001-9030.2014.08.018

• 维生素C
• 小鼠胚胎干细胞
• 分化
• 心肌细胞
• 悬滴法

目的利用维生素C作为诱导因子,采用悬滴法形成拟胚体,体外诱导小鼠胚胎干细胞分化为心肌细胞并检测其分化效率,同时确定这种诱导方法的最佳维生素C浓度。方法复苏小鼠胚胎干细胞,传代培养后,消化离心后重悬细胞,用悬滴法形成拟胚体,用含1×10-3、1×10-4、1×10-5、1×10-6mol/L 4种不同浓度维生素C的分化培养基对其进行诱导分化,以不添加任何诱导剂作为对照组,观察各组小鼠出现跳动拟胚体的数量,并计算分化效率;免疫荧光染色检测心肌细胞特异标志物肌钙蛋白T(cTnT);膜片钳实验检测心肌细胞自发性动作电位。结果大量的自发跳动心肌细胞在诱导分化后12 d左右开始出现。维生素C诱导小鼠胚胎干细胞分化为心肌细胞的最佳浓度为1×10-4mol/L,其分化出现跳动拟胚体的百分比为81.25%,显著高于不加诱导剂的对照组(12.50%);跳动心肌细胞cTnT染色阳性;跳动心肌细胞检测到自发性动作电位。结论最佳的维生素C浓度(1×10-4mol/L)能够明显提高体外悬滴法诱导小鼠胚胎干细胞分化为心肌细胞的效率。

• 单位
  膜生物学国家重点实验室; 首都医科大学附属北京安贞医院; 中国科学院动物研究所