水禽核糖体蛋白S12与番鸭细小病毒结构蛋白VP1的体外相互作用研究

作者：谢鹏宇; 孙婉姝; 于天飞^*; 李静; 尹海畅; 黎明; 于志丹

来源：黑龙江畜牧兽医, 2022, (07): 81-85.

DOI：10.13881/j.cnki.hljxmsy.2021.06.0246

• 番鸭细小病毒
• 核糖体蛋白S12
• 结构蛋白
• 原核表达
• GST pull-down

为了探讨水禽核糖体蛋白S12(ribosomal protein S12,RPS12)与番鸭细小病毒(Muscovy duck parvovirus, MDPV)结构蛋白VP1之间的相互作用关系，试验根据GenBank中已登录的北京鸭和浙东白鹅RPS12基因序列，人工合成重组质粒pUC57-DRPS12和pUC57-GRPS12,双酶切后回收目的片段，分别插到载体pGEX-6P-1中，构建重组质粒pGEX-DRPS12和pGEX-GRPS12。将pGEX-DRPS12、pGEX-GRPS12及含MDPV YL08株VP1基因的重组质粒pET-VP1分别转化至大肠杆菌Rosetta(DE3)感受态细胞中，IPTG诱导表达，利用HRP标记的GST或His标签单克隆抗体，通过Western-blot法鉴定重组蛋白，采用GST pull-down法体外检测水禽RPS12蛋白与VP1蛋白的相互作用情况。结果表明：获得的重组蛋白GST-DRPS12、GST-GRPS12和TRX-VP1分子质量分别为41.2,40.3,98.8 ku,浓度为1.32,1.29,0.81 mg/mL;重组蛋白TRX-VP1能够与MDPV YL08株感染的番鸭血清特异性结合，具有较好的反应原性；重组蛋白TRX-VP1可以和GST-DRPS12、GST-GRPS12在体外相互作用。说明MDPV VP1蛋白与水禽RPS12蛋白存在相互作用关系。

• 单位
  齐齐哈尔大学