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摘要
目的 耳念珠菌是一种新出现的多重耐药酵母菌，本研究拟建立基于重组酶聚合酶扩增（RPA）技术的耳念珠菌检测方法并评价。方法 针对念珠菌5.8S和ITS2基因区域设计耳念珠菌特异性引物和念珠菌通用引物，评价其最低检测限；选取65株菌对其特异度进行评价；同时测定其在非培养条件下对该病原的检出能力。用5种常见念珠菌和耳念珠菌对念珠菌通用RPA检测方法进行评价。结果 耳念珠菌特异性RPA检测方法检测下限为103拷贝/反应，与聚合酶链式反应（PCR）检测下限相同，37℃下反应时间20 min，特异度为100.00%。可以在2.5 h内检测出血液中的耳念珠菌，其检测下限为1.02×10～3菌落形成单位（CFU）/mL，与PCR检测下限相同。念珠菌通用引物可通过扩增产物大小不同，实现5种常见念珠菌与耳念珠菌的初步鉴别。可在白色念珠菌与耳念珠菌菌量比（5∶1,1∶1,1∶5）的混合感染情况下产生两种易于区分的条带。种易于区分的条带。结论 本研究建立的耳念珠菌RPA检测方法，具有简便、快速、成本低的特点，表现出了较高的灵敏度与特异度，可以实现5种临床常见念珠菌与耳念珠菌的初步鉴别诊断。
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