miR-383靶向Notch1对结肠癌HCT116细胞增殖和迁移的影响

作者：王晓元; 赵轶峰; 杨永江; 黄迪; 苏卓彬; 李坤; 李晶晶; 李曙光^*

来源：国际消化病杂志, 2021, 41(01): 38-44.

• 结肠癌
• miR-383
• Notch1

目的分析miR-383和Notch1在结肠癌中的作用及机制。方法选择2017年4月至2020年3月在河北北方学院附属第一医院经病理检查确诊为结肠癌的74例患者,收集其经手术切除的肿瘤组织及癌旁正常组织(距肿瘤边缘>3 cm)。采用TargetScan预测miR-383的潜在靶基因,采用双荧光素酶报告基因实验、逆转录定量聚合酶链反应(qRT-PCR)和蛋白质印迹法(Western Blot)验证这一预测。采用免疫组织化学法、Western Blot和qRT-PCR检测Notch1在结肠癌组织和癌旁正常组织中的表达水平。分别在结肠癌HCT116细胞中转染阴性对照(NC)、miR-383模拟物、Notch1及共转染miR-383模拟物+Notch1,对应分为miR-NC组、miR-383组、Notch1组及miR-383+Notch1组;另设一组空白对照组。采用CCK8法和Tranwell实验检测miR-383模拟物和Notch1对结肠癌细胞增殖和迁移能力的影响。构建结肠癌裸鼠移植瘤模型,将裸鼠随机分为miR-NC模型组(n=3)和miR-383模型组(n=3),观察miR-383模拟物对裸鼠肿瘤生长的影响。结果双荧光素酶报告基因实验结果显示,miR-383组的Notch1野生型质粒荧光素酶活性较miR-NC组明显降低(20.07±0.12比13.61±0.19,P<0.01)。与miR-NC组相比,miR-383组中Notch1 mRNA和蛋白表达均明显降低(P均<0.01)。结肠癌组织中的Notch1 mRNA和蛋白表达水平均明显高于癌旁正常组织(P均<0.01)。细胞实验显示,与miR-NC组相比,Notch1组细胞的增殖、迁移能力明显升高,miR-383组细胞的增殖、迁移能力降低;miR-383+Notch1组的细胞增殖、迁移能力较miR-383组明显升高。在结肠癌移植瘤裸鼠模型中,miR-383模型组肿瘤组织中Ki67和Notch1蛋白表达水平均明显低于miR-NC模型组。结论 Notch1具有促进结肠癌细胞增殖和迁移的作用,而miR-383能靶向调控Notch1以抑制结肠癌细胞的生物学行为并减缓裸鼠肿瘤的生长。miR-383具有抑制结肠癌的作用。

• 单位
  河北北方学院附属第一医院