丹酚酸B对三氧化二砷诱导HepaRG人肝细胞损伤的保护作用

作者：孙佳富; 孙潇; 罗云; 高晔; 王姗; 南凤尾; 孙晓波^*; 孙桂波^*

来源：中国实验方剂学杂志, 2020, 26(08): 68-74.

DOI：10.13422/j.cnki.syfjx.20200821

• 丹酚酸B
• 三氧化二砷
• 肝细胞损伤
• 肝保护

目的:探讨丹酚酸B对三氧化二砷(As2O3)诱导的Hepa RG人肝细胞损伤的保护作用及其机制。方法:采用5μmol·L-1As2O3孵育24 h建立Hepa RG人肝细胞损伤模型。实验设置空白组、模型组(As2O35μmol·L-1),单给药组(丹酚酸B 10μmol·L-1),丹酚酸B高浓度组(丹酚酸B 10μmol·L-1+As2O35μmol·L-1),丹酚酸B中浓度组(丹酚酸B5μmol·L-1+As2O35μmol·L-1),丹酚酸B低浓度组(丹酚酸B 2. 5μmol·L-1+As2O35μmol·L-1)。丹酚酸B预孵育2 h,弃去含药培养基,继续用5μmol·L-1As2O3孵育24 h;实验终止,通过噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞存活率,Hoechst33342荧光染色观察细胞凋亡,Annexin V-FITC/碘化丙啶(PI)双染色流式细胞术定量检测细胞凋亡率,JC-1荧光染色观察线粒体膜电位,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测相关蛋白B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax),蛋白激酶B(Akt),磷酸化Akt(p-Akt)表达对丹酚酸B的肝脏保护作用机制。结果:As2O3浓度依赖性的降低Hepa RG细胞的存活率(P <0. 01);丹酚酸B单独作用2 h对正常细胞活力无影响;丹酚酸B(5,10μmol·L-1)预孵育2 h可显著增加由As2O3引起的细胞存活率下降(P <0. 01)。As2O3导致肝细胞凋亡比例显著上升(P <0. 01),丹酚酸B(10μmol·L-1)预孵育可降低细胞凋亡率(P <0. 01);As2O3孵育24 h引起线粒体膜电位下降,丹酚酸B可维持线粒体膜电位,提示丹酚酸B的抗凋亡作用与其抑制凋亡线粒体通路有关;与As2O3组比较,丹酚酸B预处理升高了Bcl-2/Bax水平(P <0. 01),增加了p-Akt/Akt水平(P <0. 01)。结论:丹酚酸B对As2O3诱导的肝细胞损伤具有保护作用,其作用机制与维持线粒体功能、抑制肝细胞凋亡有关。

• 单位
  中国医学科学院药用植物研究所; 哈尔滨商业大学