分子伴侣共表达对牛成纤维细胞生长因子-2在大肠埃希菌中表达水平和生物活性的影响

作者：孙丹; 王莉洁; 徐晓辉^*; 何伟

来源：中国生物制品学杂志, 2018, 31(10): 1095-1103.

DOI：10.13200/j.cnki.cjb.001884

• 分子伴侣
• 成纤维细胞生长因子-2
• 大肠埃希菌
• 表达水平
• 生物学活性

目的研究分子伴侣共表达对重组牛成纤维细胞生长因子-2(recombinant bovine fibroblast growth factor-2,rb FGF-2)表达水平及生物活性的影响。方法根据大肠埃希菌密码子使用偏好性,设计合成rbFGF-2核苷酸序列全长,构建表达rbFGF-2的载体pET-15b-rbFGF-2。将编码伴侣蛋白GroES-GroEL的质粒pGro7和载体pET-15b-rbFGF-2先后转化至大肠埃希菌BL21(DE3)中进行共表达。表达产物进行Western blot鉴定,经Ni-Agarose亲和层析纯化后,MTS法测定其生物学活性。结果酶切鉴定和测序结果证实,rbFGF-2基因序列与设计序列相同,且在NdeⅠ和Bam HⅠ位点连入表达载体。表达的rbFGF-2蛋白相对分子质量约21 000,主要以包涵体形式存在,表达量约占菌体总蛋白的37.8%,可与牛FGF-2单克隆抗体特异性结合;纯化后,SDS-PAGE检测其纯度超过95%。含有共表达系统的大肠埃希菌中rbFGF-2蛋白表达量为仅含表达载体的大肠埃希菌的2.28倍。在6.25 ng/ml浓度时,rbFGF-2蛋白具有显著的促细胞增殖作用。结论分子伴侣GroES-GroEL共表达能够显著提高rbFGF-2蛋白的表达水平及其生物活性。

• 单位
  沈阳何氏眼科医院; 辽宁何氏医学院