大鼠骨髓间充质干细胞来源的胞外囊泡分离和鉴定

作者：葛锁华; 马永宾; 芮星; 张俊华; 汪雪峰; 苏建华

来源：细胞与分子免疫学杂志, 2017, 33(10): 1381-1384.

DOI：10.13423/j.cnki.cjcmi.008458

• 骨髓间充质干细胞
• 胞外囊泡
• 分离
• 鉴定

目的探讨大鼠骨髓间充质干细胞来源的胞外囊泡(BMSC-EV)的分离、鉴定及-80℃冻存对BMSC-EV膜结构完整性的影响。方法应用超高速离心法从大鼠BMSC培养上清液(BMSC-CS)中分离并纯化EV,扫描电镜和透射电镜观察其大小和形态;Western blot法检测EV标志性蛋白CD63的表达;-80℃冻存后,不同时间段通过透射电镜观察EV膜结构的完整性。结果扫描电镜观察BMSC表面附着有大量膜结构的EV,形态呈圆形或椭圆形,直径约501000 nm;透射电镜观察BMSC-EV具有膜结构,形态和大小与扫描电镜结果一致;Western blot结果表明,BMSC-EV表达CD63;-80℃冻存后,在第1个月和第3个月分别通过透射电镜观察BMSC-EV膜结构完整,而冻存第6个月BMSC-EV膜结构破裂。结论成功提取了BMSC-EV,且随着冻存时间的延长,其膜结构完整性降低。

• 单位
  江苏大学附属医院; 江苏大学