胚胎胎SD大鼠神经干细胞原代培养及分化鉴定的实验研究

作者：张仁坤; 李晓红; 陈星; 陈彦婷; 涂悦; 张赛

来源：武警后勤学院学报(医学版), 2016, 25(05): 337-332.

DOI：10.16548/j.2095-3720.2016.05.001

• 神经干细胞
• 原代培养
• 免疫荧光
• 分化

【目的】建立胚胎SD大鼠神经干细胞(neural stem cells,NSCs)原代培养的方法,免疫荧光鉴定其纯度和分化潜能。【方法】取孕14 d的SD大鼠,麻醉消毒后分离胎鼠大脑海马组织,研磨并胰酶消化后离心,计数后分瓶培养,倒置显微镜下观察神经干细胞生长情况。当神经球直径100150μm时,胰酶消化后计数传代培养。取第3代神经干细胞行巢蛋白免疫荧光染色鉴定其纯度。将第3代神经干细胞消化计数后种植于预铺多聚赖氨酸的培养板中,7 d后行微管相关蛋白2(microtubulinassociated protein 2,MAP2)、胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)和髓鞘碱性蛋白(myelin basic protein,MBP)免疫荧光染色鉴定其分化潜能。【结果】显微镜下可见神经干细胞生长良好,增殖迅速,7 d左右可形成直径大小为150μm的神经球,细胞透光度好。第3代神经干细胞经免疫荧光染色证实纯度95%以上。分化鉴定实验可见MAP2、GFAP和MBP阳性细胞。【结论】成功建立胚胎SD大鼠神经干细胞原代培养方法,细胞状态好、纯度高。神经干细胞有多样分化潜能,可分化为神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞,为神经系统损伤修复和退变性疾病的细胞替代治疗提供了实验基础。

• 单位
  武警后勤学院