慢性阻塞性肺疾病相关性气管支气管软化症模型建立及评价

作者：李雪莲; 余薇; 周鹏程^*

来源：中国老年学杂志, 2023, 43(24): 5971-5978.

• 慢性阻塞性肺疾病相关性气管支气管软化症
• 试验模型
• 丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)抑制剂(SB203580)
• caveolin-1-p38MAPK信号通路

目的 建立一种慢性阻塞性肺疾病(COPD)相关性气管支气管软化症模型制备方法，并评价丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)抑制剂(SB203580)的作用效果。方法 通过烟熏联合脂多糖气管滴入法制备大鼠COPD模型，分离COPD大鼠气管支气管软骨细胞、培养及传代，然后加入10 ng/ml白细胞介素(IL)-1β处理筛选的软骨细胞24 h诱导软骨细胞退变，建立COPD相关性气管支气管软化症模型。采用SB203580干预退变软骨细胞，流式凋亡和CCK8法分别检测软骨细胞凋亡、增殖活性；甲苯胺蓝染色和免疫组织化学法观察软骨细胞蛋白聚糖和Ⅱ型胶原含量；Western印迹检测软骨细胞caveolin-1、p38MAPK、IL-1β、基质金属蛋白酶(MMP)-13蛋白表达；荧光定量聚合酶链反应(qPCR)法检测软骨细胞caveolin-1、p38MAPK、IL-1β、MMP-13表达水平。结果 COPD大鼠支气管软骨细胞分离鉴定成功，10 ng/ml IL-1β即能诱导构建稳定的COPD相关性气管支气管软化症细胞模型；通过CCK8法筛选确定第4代支气管软骨细胞、5μmol/L SB203580为最佳传代细胞和干预剂量，依上述条件分别处理各组软骨细胞48 h。甲苯胺蓝染色和免疫组织化学分析表明，SB203580处理可以有效提高COPD相关性气管支气管软化症细胞模型软骨细胞的蛋白聚糖和Ⅱ型胶原含量；细胞流式检测结果显示：SB203580可以显著降低细胞凋亡，显著增强细胞增殖活性(P<0.05);Western印迹检测结果表明：SB203580可以有效抑制caveolin-1、p38MAPK、MMP-13、1L-1β蛋白表达；qPCR检测结果表明SB203580可以有效抑制MMP-13、p38MAPK、caveolin-1、IL-1β基因的表达。结论 10 ng/ml IL-1β可诱导构建稳定的COPD相关性气管支气管软化症细胞模型；SB203580可提高该模型软骨细胞的蛋白聚糖和Ⅱ型胶原含量及提高细胞活性，同时减少软骨细胞凋亡。其作用可能与SB203580抑制caveolin-1-p38MAPK信号通路中关键信号分子caveolin-1、p38MAPK表达及降低下游效应产物MMP-13、1L-1β的表达水平有关。

• 单位
  成都中医药大学附属医院; 成都中医药大学; 四川省第二中医医院