β-glucan诱导训练免疫及其在逆转免疫耐受中的应用

作者：钟秋梅; 张佳; 李林英; 郑世进^*

来源：中国实验动物学报, 2022, 30(08): 1013-1022.

• β-葡聚糖
• 训练免疫
• CLP
• 免疫耐受
• 耐受逆转

目的 本研究拟通过在体内和体外诱导训练免疫反应，以探讨诱导训练免疫是否可能逆转免疫耐受状态。方法 以β-glucan作为训练免疫诱导剂，建立体外小鼠胫骨来源的巨噬细胞(bone marrow derived-macrophages, BMDM)训练免疫模型：40μg/mL β-glucan刺激BMDM 24 h,随后用PBS洗涤后让BMDM在完全培养基中静息6 d,在第3天的时候补充培养基，第7天收集细胞100 ng/mL LPS再刺激，4 h后收集细胞抽提RNA和24 h后收集细胞上清；建立β-glucan体内训练免疫模型：野生型C57BL/6J腹腔注射1 mg β-glucan,对照组腹腔注射200μL的PBS,7 d后感染金黄色葡萄球菌(每只1×104/200μL PBS)。LPS诱导体外免疫耐受，体外免疫耐受逆转通过在耐受的BMDM中加入40μg/mL β-glucan刺激24 h,随后让细胞静息1 d,通过促炎因子的恢复水平来反映耐受逆转情况。盲肠结扎穿刺(cecal ligation and puncture, CLP)诱导体内免疫耐受，体内免疫耐受逆转通过向CLP组腹腔注射1 mg β-glucan,通过再次感染非致死剂量的细菌或真菌的生存率反映耐受逆转情况。结果 (1)经过β-glucan训练的BMDM,在LPS再次刺激时产生更高水平的促炎因子TNF-α、IL-6和NO。同时，β-glucan训练的BMDM通过激活m-TOR信号通路，导致细胞代谢模式向糖酵解转变，引起细胞内乳酸增多；(2)β-glucan诱导的体内训练免疫具有保护作用；(3)β-glucan在体外能够逆转LPS诱导的免疫耐受，恢复BMDM促炎细胞因子的产生；(4)目前我们的结果尚未证实β-glucan在体内可以逆转CLP诱导的免疫耐受。结论 本研究成功地建立了β-glucan体外和体内训练免疫模型，并证明了在体外β-glucan能逆转LPS诱导的免疫耐受，但是目前结果尚未证实β-glucan在体内能够逆转CLP诱导的免疫耐受，提高二次感染生存率。

• 单位
  厦门大学; 生命科学学院; 细胞应激生物学国家重点实验室