感染与未感染桃拉病毒凡纳宾对虾基因差异表达文库的构建

作者：黎铭; 陈晓汉; 熊建华; 李咏梅; 陈秀荔; 蒋伟明; 曾地刚; 彭敏; 马宁; 杨春玲

来源：西南农业学报, 2010, 23(01): 234-238.

DOI：10.16213/j.cnki.scjas.2010.01.066

• 凡纳宾对虾
• 桃拉病毒
• 基因文库
• 抑制性差减杂交

为了寻找对虾抗桃拉病毒(TSV)相关基因信息,研究对虾抗TSV分子机理。应用抑制性差减杂交(SSH)技术,构建TSV感染后存活凡纳宾对虾与未感染凡纳宾对虾的基因差异表达文库,并通过相对定量PCR以及斑点杂交分别对SSH的效率以及文库的可靠性进行验证。结果表明,SPR凡纳宾对虾和SPF凡纳宾对虾攻毒后的死亡率分别为12%和90%;在SSH系统中,相对于未进行杂交的cDNA样品,杂交后的cDNA样品的β-肌动蛋白(β-actin)几乎没有被检测出,说明SSH操作系统是高效率的。通过文库构建则获得正负2个文库,其中正库含阳性克隆1051个,负库含阳性克隆580个;而经斑点杂交验证,共获差异表达克隆321个,其中攻毒组高表达克隆270个,未攻毒组高表达克隆51个。可见,SPR凡纳宾对虾具有较强的抗TSV能力,以之为基础构建的对虾基因差异表达文库具有高度的可靠性,由文库得到的基因信息对获取对虾抗(TSV)相关基因具有潜在的应用价值。

• 单位
  广西水产研究所