五味子甲素协同吉西他滨抑制胆管癌TFK-1细胞的增殖并促进其凋亡

作者：陈鹏; 曾智锐; 雷珊; 沈伊依; 张丹; 江建新^*

来源：肿瘤, 2020, 40(06): 377-387.

• 胆管肿瘤
• 五味子素
• 吉西他滨
• 细胞增殖
• 细胞凋亡

目的:检测五味子甲素(deoxyschizandrin)单药及联合吉西他滨(gemcitabine)对胆管癌TFK-1细胞增殖及凋亡的影响,并探讨其可能的作用机制。方法:采用不同浓度的五味子甲素(12.5、25和50 μmol/L)及等体积DMSO(作为对照组)处理TFK-1细胞,应用CCK-8法检测五味子甲素对TFK-1细胞增殖的影响并计算半数抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC50)。以不同浓度的吉西他滨(0、0.1、1、10和100 μmol/L)单药或联合五味子甲素(25 μmol/L)处理TFK-1细胞,CCK-8法检测五味子甲素(25 μmol/L)与各浓度吉西他滨的协同指数(q值)。分别采用不同浓度的五味子甲素(12.5、25和50 μmol/L)以及吉西他滨(1 μmol/L)单药、五味子甲素(25 μmol/L)单药或吉西他滨(1 μmol/L)联合五味子甲素(25 μmol/L)处理TFK-1细胞,均以DMSO处理细胞作为对照组;应用平板克隆实验检测各组TFK-1细胞的克隆形成能力,DAPI染色法和FCM法检测对TFK-1细胞凋亡的影响。采用计算机分子对接技术验证五味子甲素与蛋白靶点表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)和磷脂酰肌醇3-激酶(phosphoinositide 3-kinase,PI3K)的结合能力;应用蛋白质印迹法检测TFK-1细胞中EGFR、PI3K、蛋白激酶B(protein kinase B,PKB,又称AKT)、磷酸化AKT(phospho-AKT,p-AKT)、剪切型-caspase 3(cleaved-caspase 3)、cleaved-caspase 8和Bcl-2的表达水平。结果:五味子甲素对TFK-1细胞的杀伤作用与浓度具有依赖性,五味子甲素对TFK-1细胞的IC50值为32.13 μmol/L。五味子甲素与吉西他滨存在协同效应,吉西他滨(1 μmol/L)联合五味子甲素(25 μmol/L)的q值最大为1.40。五味子甲素单药即能明显抑制TFK-1细胞的克隆形成能力,联合吉西他滨能进一步提高对TFK-1细胞克隆形成的抑制作用(P值均<0.05)。五味子甲素单药即能明显提高TFK-1细胞的凋亡率,联合吉西他滨能进一步提高诱导TFK-1细胞凋亡的能力(P值均<0.05)。计算机分子对接结果显示,五味子甲素能够与其蛋白靶点EGFR和PI3K的活性口袋稳定结合。相较于DMSO处理组,五味子甲素处理后TFK-1细胞中EGFR、PI3K、p-AKT和Bcl-2蛋白的表达水平均明显下调,而cleaved-caspase 3和cleaved-caspase 8蛋白的表达水平明显上调(P值均<0.05);相较于五味子甲素或吉西他滨单药组,五味子甲素联合吉西他滨显著下调EGFR、PI3K、p-AKT和Bcl-2的表达水平,而显著上调cleaved-caspase 3和cleaved-caspase 8蛋白的表达水平(P值均<0.05)。结论:五味子甲素通过EGFR/PI3K通路抑制胆管癌TFK-1细胞的增殖并诱导其凋亡,且与吉西他滨存在协同作用。

• 单位
  武汉大学人民医院; 贵州医科大学; 基础医学院