食源性致病菌生物芯片-RCA检测新方法

作者：李同祥; 黄天姿; 孙会刚; 汤薇; 田林; 李文; 张传丽; 王春燕

来源：徐州工程学院学报(自然科学版), 2019, 34(02): 26-34.

DOI：10.15873/j.cnki.jxit.000285

• 生物芯片
• 滚环扩增
• 致病菌
• 检测探针

将生物芯片技术和滚环扩增(rolling circle amplification,RCA)技术结合,建立一种在片RCA检测食源致病性菌新方法.依据待检测致病菌的基因组序列设计捕获探针(capture probe,CP)、检测探针(detect probe,DP)和滚环探针(rolling circle probe,RCP),其中捕获探针、检测探针与待检测致病菌基因组序互补,RCP不含任何待检菌基因组DNA序列,CP的5′末端修饰氨基,将其点样制备成CP微阵列,DP、RCP与待检菌gDNA混合后变性,将其与CP微阵列杂交并连接,RCA扩增反应体系中加入链亲和素进行在片扩增反应,分析检测结果.研究表明,该方法能灵敏、特异性地检测单一和混合靶标分子,以金黄色葡萄球菌为检测对象,其最低检测限可到达50fg/μL,其线性范围是400～50fg/μL,R2达到0.97,证实了该方法的可行性和可靠性,为食源性致病菌检测提供了新的技术方法.

• 单位
  徐州工程学院; 化学化工学院