桑花叶型萎缩病相关病毒的SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测方法

作者：孙勋勋; 杨宏宇; 周轶楠; 刘吉平^*

来源：广东农业科学, 2019, 46(08): 111-117.

DOI：10.16768/j.issn.1004-874X.2019.08.015

• 桑树
• 双生病毒
• 桑花叶型萎缩病
• 桑花叶型萎缩病相关病毒
• 实时荧光定量PCR

【目的】建立桑花叶型萎缩病相关病毒(Mulberry Mosaic Dwarf associated Virus,MMDaV)的实时荧光定量PCR检测方法。【方法】以MMDaV保守的外壳蛋白基因为靶基因,设计特异引物,构建外壳蛋白基因序列的阳性质粒,建立阳性质粒的标准曲线,并对MMDaV特异引物的灵敏性和特异性进行检测,并使用建立的MMDaV实时荧光定量PCR检测方法检测广东、广西、海南、重庆、陕西和江西6个省区的桑病叶样品。【结果】构建的标准曲线具有良好的扩增效率(97.88%),设计的特异引物可特异的检测到MMDaV,最低的质粒检测浓度为8 copies/μL,是普通PCR灵敏度的24倍,并且MMDaV实时荧光定量PCR检测方法对6个省区的桑病叶样品均有良好的检测结果,检测的Cq值在9.69～26.17之间。【结论】建立的MMDaV实时荧光定量PCR检测方法具有高效率、特异性好和灵敏度高等特性,可被应用于寄主体内MMDaV的定量检测。

• 单位
  华南农业大学