骨保护素的克隆及对骨髓间充质干细胞分化的影响

作者：陈富; 徐希彦; 柯珍勇; 尹良军; 郭常辉; 王雪燕; 林春阳; 邓忠良

来源：重庆医科大学学报, 2009, (05): 532-536.

• 腺病毒
• 人骨保护素
• 骨髓间充质干细胞

目的:克隆人骨保护素(Osteoprotegerin,OPG)基因并构建其重组腺病毒,观察其对BMSCs分化的影响.方法:RT-PCR方法从人肝克隆OPG基因全长cDNA,利用穿梭质粒将OPG基因重组获得复制缺陷型重组腺病毒AdOPG;分离培养兔骨髓间充质干细胞,使用AdOPG感染兔BMSCs,以RT-PCR及Western Blot的方法鉴定BMSCs对OPG的表达。比色测定和细胞碱性磷酸酶染色法观察AdOPG感染BMSCs后5d时碱性磷酸酶(ALP)的表达。结果:克隆获得人OPG基因,测序与Gene bank一致,构建的重组腺病毒AdOPG滴度达109efu/ml,AdOPG感染BMSCs5d后ALP活性值为(21024±507)IU,AdGFP对照组为(3079±89)IU,空白对照组为(2156±78)IU。结论:骨保护素有利于骨髓间充质干细胞向成骨细胞方向分化。

• 单位
  重庆医科大学附属第二医院