猪流行性腹泻病毒通过miR-133c-3p/BCL2L2轴调控细胞凋亡

作者：郑红青; 吴旭锦^*; 朱小甫; 尹宝英; 高军花; 李艳芝; 植婵萍

来源：畜牧兽医学报, 2021, 52(08): 2233-2243.

• 猪流行性腹泻病毒
• 微小RNA133c-3p
• BCL2样蛋白
• 凋亡

旨在探讨miR-133c-3p在猪流行腹泻病毒(PEDV)引起的细胞凋亡过程中所起的作用,并探讨其发挥作用的机制。以PEDV感染MARC-145细胞为模型,检测PEDV感染过程中细胞的凋亡情况以及6个与凋亡相关microRNAs的表达差异,RT-qPCR检测PEDV感染过程中与凋亡相关microRNAs的表达差异,合成miR-133c-3p的模拟物和抑制剂,转染MARC-145细胞,采用流式细胞术检测PEDV感染MARC-145细胞的凋亡情况,流式细胞术检测过表达和敲低miR-133c-3p后细胞的凋亡情况,采用生物信息学方法预测miR-133c-3p的靶基因,荧光素酶报告基因检测了miR-133c-3p和靶基因的结合情况,Western blot检测了过表达miR-133c-3p对BCL-w和PEDV蛋白表达水平的调控,用siRNA敲低BCL-w蛋白检测细胞凋亡情况。结果显示,PEDV的感染可以诱导MARC-145细胞凋亡(P<0.05),与凋亡相关的microRNAs,如miR-133c-3p和miR-149-5p的表达上调(P<0.05;P<0.001),miR-138-3p的表达下调(P<0.05)。其中,miR-133c-3p在病毒感染后升高了约5倍(P<0.01)。过表达miR-133c-3p后,细胞凋亡率显著升高(P<0.01);敲低miR-133c-3p后,细胞凋亡率降低(P<0.05)。用生物信息学方法预测miR-133c-3p与BCL2L2的3′UTR区域有结合位点,荧光素酶报告基因试验显示miR-133c-3p可以和BCL2L2基因靶向结合(P<0.01),过表达miR-133c-3p后细胞内BCL-w蛋白的表达明显下调,且病毒的感染可以降低BCL-w的表达水平,敲低BCL-w后细胞凋亡率显著升高(P<0.01)。PEDV感染后可以通过上调miR-133c-3p的表达来下调BCL2L2的表达,从而促进细胞的凋亡。

• 单位
  咸阳职业技术学院; 衡水职业技术学院