科研之友
微信
新浪微博
Facebook
分享链接
摘要
目的：建立以聚乳酸聚羟基乙醇酸共聚物(PLGA)为载体的生物可降解缓释纳米颗粒系统,探索该系统载药伏立康唑(VRC)抗真菌增效作用；利用该生物可降解缓释纳米颗粒系统缓释效应,将神经碱性髓鞘蛋白(MBP)68-86特异性肽段载入该系统,证实该系统在诱导实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)免疫耐受效果。 方法：1、以乳化-溶剂挥发法结合高压均质工艺制备PLGA缓释纳米颗粒。通过扫描电镜、激光粒径分析仪研究颗粒特征、以高效液相分析伏立康唑和MBP68-86 PLGA纳米颗粒载药和体外释放情况。2、抗真菌作用研究,对伏立康唑PLGA纳米球颗粒与伏立康唑进行体内、体外抗菌疗效比较研究。同时,观察纳米颗粒和主药对肾脏组织的影响。体内抗菌效果,通过对纳米球颗粒和主药对白色假丝念珠菌感染昆明小鼠的抗真菌作用进行评价；H.E.染色观察给药后肾脏组织的变化。3、诱导免疫耐受,以Lewis大鼠为研究对象,在建立EAE模型前,分别腹腔给予PBS、MBP68-86和MBP68-86 PLGA纳米囊颗粒(一次性给药),比较上述物质对EAE产生免疫耐受的影响。实验通过MBP68-86联合完全氟氏佐剂建立EAE疾病模型,对模型进行临床评分,评价模型动物疾病严重程度。同时,分析淋巴细胞增殖反应；H.E.染色观察脊髓炎症浸润情况；免疫组化观察脊髓中CD4+、CD8+T细胞变化；应用ELISA法检测血清中IFN-γ和IL-4水平。 结果：1、通过扫描电镜和激光粒径分析仪分析可知3％偏磷酸盐可以改善固化后胶体溶液中颗粒的分散情况；3％的右旋糖酐在冷冻干燥粉体中形成骨架,可以改善冷冻干燥固体纳米颗粒的分散性。分散良好的纳米颗粒表面规整,呈规则的球形结构,团聚现象得到改善,粒径分布由微米级降低到纳米级；体外降解观察颗粒在第5-7日纳米囊破裂时间,导致突释的扩散释放效应消失；固化温度分析室温下获得颗粒优于50℃下操作。前者颗粒表面更致密,更利于延长释放时间。2、扫描电镜图显示,伏立康唑PLGA纳米球颗粒分散良好,球形规整。辅料中有无偏磷酸盐其载药量分别为2.01±0.27％和1.73±0.24％(n=3);激光粒径分析对应为O.158±0.041/μm和7.134±1.165/μm(n=5);20％乙醇处理降低突释33％(n=3),经过醇溶液处理后释放曲线为准零级动力学释放；固化过程W2中主药浓度分析,5h后浓度出现拐点。抗真菌研究发现体内、外7日抗菌效果伏立康唑PLGA纳米颗粒较主药具有更为持久的抗菌作用。伏立康唑PLGA纳米颗粒(3.5mg/mL)和主药(70μg/mL)体外结果显示,7日后真菌CFU数分别为5.74 log(10)和6.72 log(10)(P<0.05);体内结果显示,昆明小鼠口腔给药伏立康唑和伏立康唑PLGA纳米颗粒,7日后肾脏组织中真菌数(CFU/g)分别为2.61 log(10)和0.64 log(10)(5mg/kg,P<0.001)。病理研究伏立康唑PLGA纳米颗粒安全性更好。3、扫描电镜图显示MBP68-86 PLGA纳米囊颗粒分散良好,球形规整。辅料中有无偏磷酸盐其载药量分别为1.61％±0.13％和1.34％±0.12％(n=3),药物7日累积释放90％；激光粒径分析对应为0.330±0.009/μm和8.273±0.131/μmn=5);以MBP68-86 PLGA纳米囊颗粒和MBP68-86免疫耐受后,再以MBP68-86结合完全氟氏佐剂诱导EAE动物模型,临床发病评分较轻,发病时间延迟且恢复较快。与对照组比较,淋巴细胞对特异性抗原MBP68-86的反应性显著降低(P<0.05);脊髓炎性细胞浸润轻微,脊髓中CD4+、CD8+T细胞表达明显少于PBS组(P<0.05),血清中IFN-γ水平显著降低(P<0.05);IL-4水平比对照组高,P<0.05。 结论：1、以乳化.溶剂挥发法结合高压均质工艺可以获得纳米级颗粒。3％偏磷酸盐可以改善胶体溶液中纳米颗粒分散性,3％右选糖酐可以改善冻干粉体中颗粒分散情况,在制备过程中加入偏磷酸盐和右旋糖酐辅料可以克服纳米颗粒团聚现象。2、伏立康唑PLGA纳米颗粒抗菌作用强于伏立康唑,且作用持久,安全性更好。3、MBP68-86 PLGA纳米颗粒可以通过一次性给药达到全程免疫耐受效果,减轻EAE的发病程度,延迟发病时间,缩短恢复时间。
- 单位
