高效液相色谱荧光法测定人红细胞内甲氨蝶呤及其谷氨酸聚合物浓度

作者：张桂杰; 廖婷; 接红宇; 陈文瑛; 李强

来源：中国临床药理学杂志, 2024, 40(01): 117-120.

DOI：10.13699/j.cnki.1001-6821.2024.01.024

• 甲氨蝶呤
• 多聚谷氨酸甲氨蝶呤
• 在线固相萃取
• 高效液相色谱
• 类风湿性关节炎

目的 建立一种灵敏、准确、简单地测定人红细胞中甲氨蝶呤（MTX）及多聚谷氨酸甲氨蝶呤（MTXPG2和MTXPG3）浓度的方法。方法 采用双三元液相色谱系统串联荧光检测器，使用C18-WP柱（20 mm×4 mm, 5μm）作为在线固相萃取柱，Athena C18-WP柱（150 mm×4.6 mm, 3μm）作为分析柱。红细胞裂解液用硫酸锌-10%甲酸的甲醇（100∶90,v/v）沉淀蛋白，柱后添加H2O2光化学衍生MTXPGs,荧光检测激发波长为274 nm,发射波长为470 nm,柱温为40℃,进样体积为100μL。考察该方法的专属性、标准曲线与定量下限、精密度与回收率、稳定性。结果 MTX、MTXPG2和MTXPG3在12.5～400.0 nmol·L-1线性良好，MTX的标准曲线为y=763.8x-2 961.1（R2=0.999 5）,提取回收率为60.7%～66.1%;MTXPG2的标准曲线为y=1 017.8x-239.8（R2=0.998 4）,提取回收率为67.2%～67.3%;MTXPG3的标准曲线为y=1 069.1x-819.6（R2=0.999 4）,提取回收率为62.9%～70.1%;日内精密度RSD2和MTXPG3浓度。

• 单位
  南方医科大学第三附属医院