利用DNA Assembly方法构建重组腺病毒载体

作者：黄蕾; 万常青; 刘美琴; 赵敏; 郑妍鹏; 彭向雷; 虞结梅; 付远辉^*; 何金生^*

来源：中国生物工程杂志, 2021, 41(06): 23-26.

DOI：10.13523/j.cb.2102031

• 重组腺病毒载体
• DNA Assembly

目的:建立一种基于DNA Assembly方法的重组腺病毒载体构建方法。方法:首先,通过设计合适的酶切位点及同源臂,采用了传统的限制性内切核酸酶连接方法和DNA Assembly方法获得63型猩猩腺病毒(Chimpanzee adenovirus serotype 63,ChAd63)的骨架质粒pChAd63。随后,采用Sca I单酶切携带EGFP基因的穿梭pShuttle63/EGFP,Hpa I单酶切pChAd63,以DNA Assembly方法,获得重组腺病毒载体pChAd63/EGFP。最后,在293细胞中拯救获得重组腺病毒rChAd63/EGFP。结果:采用DNA Assembly方法成功构建了重组腺病毒载体pChAd63/EGFP,并拯救出重组腺病毒rChAd63/EGFP。结论:DNA Assembly可用于重组腺病毒载体的构建,有利于提高重组腺病毒载体的构建效率。

• 单位
  北京交通大学