利用高分辨液相质谱综合表征抗CTLA4单克隆抗体的研究

作者：武刚; 王文波; 于传飞; 崔永菲; 张荣建; 王兰^*

来源：中国药学杂志, 2020, 55(06): 457-464.

• 抗CTLA4单抗
• 高分辨液相质谱表征
• 相对分子质量
• 氨基酸序列覆盖率
• 二硫键
• N糖谱

目的研究建立抗CTLA4单抗质谱表征方法。方法以抗CTLA4单抗为研究对象,利用液相色谱-串联质谱联用技术(LC-MS/MS),通过优化液相条件与质谱参数,应用液质联用技术从完整蛋白相对分子质量、亚基相对分子质量、氨基酸序列覆盖率、二硫键、糖基化位点、N糖基化修饰等方面对抗CTLA4单抗进行全面的表征。结果抗CTLA4单抗完整相对分子质量(主要糖型,A2G0F/A2G0F)约为147 992;去糖完整相对分子质量为145 103;轻链相对分子质量为23 450,重链相对分子质量(主要糖型,A2G0F)为50 548;重链Fd段相对分子质量为25 355,重链sFc段(A2G0F,1 xKLoss) 25 189。使用Trypsin&Chymotrypsin分别进行蛋白酶解,单抗氨基酸序列覆盖率为100%; 16对二硫键全部得到鉴定,与理论二硫键连接方式一致; N糖基化修饰所在的肽段序列为EEQYNSTYR,N-糖基化修饰位点位于重链的第298位天冬酰胺残基上,有13种主要糖型,包括A2G0F(59.8%)、A2G1Fa(18.66%)、A2G1Fb(7.28%)、A2G2F(3.2%)、M5(1.66%)、A2S1G0F(1.17%)、A1G0F (1.16%)、A3G1F (0.95%)、A2G0 (0.94%)、A2S2F (0.78%)、A2S1G1F(0.67%)、A3G0F(0.53%)和A1G1F(0.51%)。结论建立了基于质谱技术对CTLA4单抗系统的表征分析方法。

• 单位
  中国食品药品检定研究院