miR-566与miR-1183靶向抑制RHD基因表达的研究

作者：王琳; 张印则; 吴宗勇; 岳贺佳; 刘瑞琪; 蔡佩佩; 陈家倪; 杨翠红; 齐军^*

来源：检验医学与临床, 2022, 19(22): 3058-3061.

DOI：10.3969/j.issn.1672-9455.2022.22.009

• RHD基因
• 双荧光素酶报告基因载体
• 微小RNA
• 3′-非编码区
• 弱D

目的 探讨Rh血型系统RHD基因表达相关微小RNA(miRNA),及其在干预RHD基因表达中的作用。方法 利用生物信息学软件TargetScan、PicTar和miRWalk预测靶向作用于RHD基因的miRNA,综合3个数据库的结果选取靶标率最高的5个miRNA进行研究。聚合酶链反应(PCR)扩增RHD基因3′-非编码区(3′-UTR)序列，插入到双酶切的双荧光素酶报告基因载体中，将报告基因载体与miRNA共转染细胞，通过相对荧光素酶活性分析测定miRNA对RHD基因的靶向作用。采用实时荧光定量PCR检测miRNA在RhD阳性及“弱D”表型样本中的表达。结果 成功构建RHD基因3′-UTR双荧光素酶报告基因载体。该报告基因载体与miRNA-566、miR-1183和miR-1207共转染细胞的相对荧光素酶活性与对照比较分别下降了37%(P<0.05)、13%(P<0.05)和14%(P<0.05),提示miRNA-566、miR-1183和miR-1207潜在靶向调控RHD基因。miRNA-566和miR-1183在“弱D”表型样本中的相对表达量显著高于RhD阳性样本(P<0.05)。结论 RHD基因3′-UTR双荧光素酶基因报告载体构建成功。miR-566和miR-1183对RHD基因有靶向抑制作用。

• 单位
  深圳大学总医院; 中国医学科学院北京协和医学院