利用α-溶血素系统分泌表达重组人白介素-6

作者：宁亚蕾; 周立雄; 张卫军; 鲁东水; 肖斌; 毛旭虎; 邹全明

来源：免疫学杂志, 2008, (04): 380-384.

DOI：10.13431/j.cnki.immunol.j.20080102

• 人白介素6
• &alpha
• -溶血素分泌系统
• hly操纵子
• 胞外分泌表达

目的构建基于大肠杆菌α-溶血素(HlyA)分泌机制的原核胞外分泌表达载体系统,将重组人白介素6(rhIL-6)分泌至胞外培养基中。方法利用分子克隆手段,从引起人泌尿道感染的大肠杆菌UPECJ96菌株染色体上获得了α-溶血素(HlyA)系统的分泌功能基因,与外源基因片段hIL-6一起克隆至pQE30骨架载体,构建了胞外分泌表达质粒pISQ,转化E.coliTop10,诱导表达后通过Western blot检测培养上清中hIL-6的表达。结果获得了与设计完全一致的pISU载体,Western blot结果显示,可以在pISQ/E.coli Top10培养液上清中检测到与His-hIL6-HlyAs融合蛋白相对分子质量大小一致的特异条带。结论大肠杆菌HlyA分泌系统操纵子能够在染色体和质粒间传递,rhIL-6能够通过该系统被特异地分泌至胞外培养基中,以可溶形式存在,为后续生物学研究奠定了基础。

• 单位
  重庆理工大学; 中国人民解放军陆军军医大学