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摘要
目的 本实验旨在利用转录组测序技术探索参与香烟烟雾提取物（CSE）诱导16HBE细胞MUC5AC上调的信号通路及其分子机制，为寻找新的慢性阻塞性肺疾病（COPD）黏液高分泌药物作用靶点提供理论依据。方法 利用转录组测序技术检测CSE引起16HBE细胞差异表达的基因（DEGs），通过生物信息学分析挖掘出可能参与CSE诱导16HBE细胞MUC5AC上调的信号通路及相关基因。利用RT-qPCR技术验证所筛选的信号通路中相关基因转录水平；利用信号通路激动剂及siRNA干扰技术分别验证该信号通路及相关基因是否参与CSE诱导的16HBE细胞MUC5AC上调过程。结果 转录组测序共检测到2 567个DEGs，生物信息学分析结果显示16HBE细胞中MAPK信号通路、WNT信号通路、PI3K-Akt等信号通路在受到CSE刺激后表达异常。RT-qPCR结果显示CSE刺激16HBE后WNT4、WNT5B、WNT6、WNT10A基因的转录水平较对照组分别下调了0.885、0.893、0.705、0.618倍（P <0.05）,WNT9A较对照组上调3.727倍（P <0.05），与转录组测序结果一致。激活经典WNT信号通路后，16HBE细胞MUC5AC转录水平较对照组上调3.197倍（P=0.0313）。而在小分子干扰实验中，WNT5B siRNA组+CSE组MUC5AC mRNA较阴性对照+CSE组上调2.092倍（P=0.0162）。结论 非经典WNT信号通路中的WNT5B在CSE刺激16HBE细胞后下调，并参与CSE诱导的MUC5AC的表达上调。
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