miR-135a-5p通过抑制FOXO1的表达促进鼻咽癌的发生

作者：周本益; 戴珊; 陈斌

来源：医学分子生物学杂志, 2020, 17(3): 187-193.

DOI：10.3870/j.issn.1672-8009.2020.03.003

• miR-135a-5p
• FOXO1基因
• 鼻咽癌
• 增殖
• 凋亡
• 侵袭能力

目的 确定miR-135a-5p与FOXO1的靶向关系,探索miR-135a-5p和FOXO1的相互作用对鼻咽癌的影响.方法 体内实验:将鼻咽癌细胞5-8F细胞注射到裸鼠中构建鼻咽癌肿瘤模型,将小鼠分为模型组和miR-135a-5p antagomir组,用RT-qPCR检测两组小鼠中miR-135a-5p和FOXO1的水平,检测肿瘤的重量和小鼠30 d内的存活率,免疫组化检测肿瘤组织中Ki67和Caspase-3的表达;体外实验:RT-qPCR检测正常鼻咽细胞系NP69和鼻咽癌细胞系(CNE-2R、5-8F、C666-1、CNE-1)中miR-135a-5p和FOXO1的表达情况;分别用miR-135a-5p inhibitor、NC inhibitor、sh-FOXO1、sh-NC转染5-8F细胞,RT-qPCR检测转染效率,Western印迹检测其中FOXO1蛋白的表达水平;用双荧光素酶报告基因实验检测FOXO1-WT和FOXO1-MUT重组质粒对荧光素酶活性的影响;用Edu染色、流式细胞技术、Transwell检测对照组、miR-135a-5p inhibitor组、sh-FOXO1组5-8F细胞的增殖、凋亡、侵袭能力.结果 相对于模型组,注射miR-135a-5p antagomir的模型小鼠体内miR-135a-5p的表达显著降低,而FOXO1却显著升高,肿瘤重量降低,小鼠30 d的存活率升高,Ki67的表达降低,Caspase-3表达升高;miR-135a-5p在正常鼻咽细胞中低表达,在鼻咽癌细胞中高表达,而FOXO1却出现截然相反的表达趋势;转染miR-135a-5p inhibitor的鼻咽癌5-8F细胞中FOXO1蛋白表达水平显著高于对照组和sh-FOXO1组;野生型(FOXO1-WT)相比于突变型(FOXO1-MUT)能使荧光素酶活性显著下降;miR-135a-5p inhibitor组Edu阳性细胞数和侵袭细胞数比对照组和sh-FOXO1组显著减少,细胞凋亡率显著升高.结论 miR-135a-5p通过靶向抑制FOXO1表达促进鼻咽癌的发生.