二甲双胍通过AMPK-自噬信号通路促进脑保护作用的研究

作者：覃智芳; 王燕泽; 陈碧华; 周满红^*

来源：中国临床药理学杂志, 2023, 39(23): 3424-3428.

DOI：10.13699/j.cnki.1001-6821.2023.23.018

• 二甲双胍
• 腺苷5′-单磷酸激酶活化蛋白
• 自噬
• 心搏骤停/心肺复苏
• 脑功能保护

目的 探讨二甲双胍(Met)预处理能否对心搏骤停/心肺复苏(CA/CPR)后脑损伤起到保护作用及其可能的机制及信号通路。方法 以电刺激法构建CA模型。将大鼠随机分为假手术组(0.9%NaCl灌胃14 d,不诱导CA)、模型组(0.9%NaCl灌胃14 d后造模)、实验组(200 mg·kg-1 Met+0.9%NaCl灌胃14 d后造模)、Cc组[200 mg·kg-1 Met+0.9%NaCl灌胃14 d,造模前1 h经腹膜腔注射5′-腺嘌呤核苷酸依赖的蛋白激酶(AMPK)抑制药Cc]、氯喹组[200 mg·kg-1 Met+0.9%NaCl灌胃14 d,造模前1 h腹膜腔注射自噬抑制药氯喹]和AICAR组(200 mg·kg-1 Met+0.9%NaCl灌胃14 d,造模前1 h经腹膜腔注射AMPK激动药AICAR)。以生存曲线记录CA/CPR后7 d生存率，以神经病残疾评分表对CA/CPR后7 d神经功能进行评分，以考马斯亮蓝法测定丙二醛(MDA)水平；以活性氧簇(ROS)荧光探针DHE检测脑组织ROS水平，以蛋白质印迹法测定脑组织中AMPK、p-AMPK、微管相关蛋白轻链3Ⅰ(LC3Ⅰ)、LC3Ⅱ、p62蛋白表达水平。结果 假手术组、模型组、实验组、Cc组、氯喹组、AICAR组大鼠的7 d生存率分别100%、40%、70%、40%、40%和65%,7 d神经功能评分分别为(78.35±1.65)、(46.50±4.41)、(67.93±4.64)、(49.50±3.53)、(52.00±2.83)和(68.33±1.53)分，ROS水平分别为(417.60±8.37)、(748.60±36.05)、(575.80±10.73)、(713.80±18.85)、(668.20±9.58)和(566.00±24.48)U·mg-1,MDA水平分别为(4.38±0.33)、(8.06±0.76)、(5.50±0.48)、(7.18±0.29)、(6.82±0.31)和(5.20±0.34)nmol·mg-1,p-AMPK/AMPK水平分别为0.74±0.04、0.87±0.01、1.61±0.01、0.55±0.05、1.09±0.09和1.27±0.07,p62相对表达水平分别为0.42±0.02、0.86±0.05、0.61±0.04、0.98±0.04和0.78±0.03,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ水平分别为0.29±0.32、0.37±0.26、0.96±0.78、0.58±0.26、0.43±0.03和1.40±0.10。实验组、AICAR组的上述指标与模型组比较，Cc组、氯喹组的上述指标与实验组比较，差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论 Met预处理通过激活AMPK信号通路、调节线粒体能量代谢、促进自噬而对大鼠CA/CPR后脑损伤发挥保护作用。

• 单位
  中国人民解放军陆军军医大学; 遵义医科大学