猪源札幌病毒衣壳蛋白的原核表达及免疫原性检测

作者：杨勃; 兰喜; 杨彬; 柳纪省; 单兴娜; 刘伟; 王恩丽; 张韵; 马小军

来源：中国兽医科学, 2014, 44(12): 1273-1278.

DOI：10.16656/j.issn.1673-4696.2014.12.012

• 猪
• 札幌病毒
• 衣壳蛋白
• 原核表达

为获得猪源札幌病毒(SaV)衣壳蛋白(VP1),以SaV CH430株的RNA为模板,采用RT-PCR扩增VP1基因;将其克隆到原核表达载体pET-30a中,并将成功构建的原核表达质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达。结果显示,获得的VP1基因全长为1 635bp,编码545个氨基酸。SDS-PAGE结果显示,目的条带大小为63ku,与预期结果相符。重组菌在37℃、IPTG终浓度为0.8mmol/L、诱导表达6h时重组蛋白的表达量达到最大值,表达的目的蛋白主要以包涵体的形式存在。将纯化的VP1重组蛋白免疫家兔,得到了超免疫血清。Western-blot分析表明,该重组蛋白与超免疫血清具有良好的反应原性。上述试验结果为深入研究VP1蛋白的功能和研制ELISA诊断试剂盒奠定了基础。

• 单位
  家畜疫病病原生物学国家重点实验室; 农业部; 甘肃农业大学; 中国农业科学院兰州兽医研究所