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摘要
背景结直肠癌（colorectal carcinoma, CRC）是临床上最为常见的消化系统恶性肿瘤,但结直肠癌细胞增殖和迁移的分子机制并为完全阐明.胱氨酸/谷氨酸反转运体X（cystine/glutamate antiporter, x CT）被证实在多种肿瘤中高表达并与细胞的铁死亡有关.目的探讨mi R-128-3p靶向x CT基因抑制结直肠癌细胞增殖、侵袭的分子机制及其与患者临床病理特征关系.方法癌症基因图谱（the cancer genome atlas, TCGA）、Oncomine数据库中比较胱氨酸/x CT基因在人结直肠癌及多种实体肿瘤中的表达.肿瘤免疫（tumor immune estimationresource, TIMER）数据库中分析x CT表达水平与淋巴细胞浸润程度关系.基因表达综合（gene expression omnibus, GEO）数据库下载结直肠癌患者癌组织vs癌旁组织差异表达mi RNA数据集GSE18392,筛序癌组织与癌旁组织差异表达mi RNA,筛选条件为Log2FC>1, adj P<0.05. micro RNA靶基因在线预测算法（Targetscan, mi RDB和Star Base）预测x CT上游靶mi RNA.GSE18392差异表达mi RNA和预测靶基因取交集得到mi R-128-3p.并采用双荧光素酶报告实验验证mi R-128-3p与x CT靶向调控关系.实时荧光定量聚合酶链反应（real time fluorescent quantitative polymerase chainreaction,RT-PCR）检测人正常肠上皮细胞及人结直肠癌细胞系、38例结直肠癌患者癌组织和癌旁组织中x CT及mi R-128-3p表达水平.溴化噻唑蓝四氮唑[3-（4,5-Dimethylthiazol-2-yl）-2,5-diphenyltetrazolium bromide（MTT）]实验和划痕实验观察转染外源性mi R-128-3p-mimic后人结癌细胞（SW480）增殖和迁移能力有无改变.结果结直肠癌组织x CT表达水平显著高于癌旁正常组织（P <0.05）.筛选并预测mi R-128-3p为x CT上游靶向调控基因.荧光素酶报告基因显示, mi R-128-3p可靶向结合x CT基因3’UTR区域. x CT在人结直肠癌细胞系（HT-29,SW480,Lo Vo及SW620）中的表达水平显著高于正常肠上皮细胞（NCM460）,（P<0.05）,而mi R-128-3p在人结直肠癌细胞系中的表达水平显著低于正常肠上皮细胞异（P<0.05）.转染外源性mi R-128-3p mimic可显著下调SW480细胞中x CT表达水平,并抑制SW480细胞增殖和迁移能力. x CT在38例结直肠癌患者癌组织中的表达水平显著高于癌旁组织（P<0.05）,而mi R-128-3p在癌组织中相对表达水平显著低于癌旁组织（P<0.05）.癌组织中mi R-128-3p与x CT表达负相关（rpearson=-0.43,P <0.05）.免疫组化显示x CT阳性表达于细胞膜,呈棕黄色颗粒,在癌组织中阳性率63.2%. x CT阳性表达与肿瘤分化（P<0.05）和脉管浸润（P<0.05）有关. x CT表达水平与结肠癌CD8+T细胞,中性粒细胞,树突状细胞浸润有关（P<0.05）,与直肠癌CD8+T细胞和中性粒细胞浸润有关（P<0.05）,而于其他淋巴细胞浸润水平无关（P>0.05）.结论x C T在结直肠癌中表达上调,m i R-128-3p可通过与x C T基因3’ U T R结合抑制肠癌细胞的增殖和迁移,mi R-128-3p/x CT通路有望成为肠癌靶向治疗新的潜在靶点.
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单位丽水学院; 丽水市人民医院; 温州医科大学
