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摘要
本研究将含有非洲猪瘟病毒p72全长基因序列的pCMV-p72重组质粒与B602L质粒共同转染HEK293F细胞，纯化获得重组p72-His蛋白，经SDS-PAGE和间接ELISA鉴定后，以该纯化蛋白免疫Balb/c小鼠，进行融合、筛选获得4株单克隆抗体。经亚型鉴定，2B2-1、34C10和22D3均为IgG1/κ型，32H5为IgG2b/κ型，4株单抗的腹水效价均高于6.4×104。免疫荧光检测结果显示4株单抗均能够特异性识别ASFV p72蛋白，亲和力试验显示4株单克隆抗体的亲和力由高到低依次为22D3＞32H5＞2B2-1=34C10，表位竞争试验也揭示这4株单克隆抗体可识别不同的抗原结合位点，且2B2-1和32H5能组成识别抗原的抗体对，34C10单抗具有竞争效应。所获得的4株杂交瘤细胞株均能够稳定分泌抗体，且分泌的抗体特异性高，亲和力强，有助于进一步研发ASFV血清学诊断方法。
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单位中国动物疫病预防控制中心; 中国检验检疫科学研究院
