猪圆环病毒2型病毒样颗粒的制备及其免疫原性研究

作者：边海桥; 黄立平; 危艳武; 夏德利; 朱红振; 吴洪丽; 于冲; 刘建行; 冯力; 刘长明^*

来源：中国兽医科学, 2021, 51(08): 1007-1014.

DOI：10.16656/j.issn.1673-4696.2021.0138

• 猪圆环病毒2型
• 病毒样颗粒
• 免疫原性

利用真核细胞表达系统制备了猪圆环病毒2型(PCV2)重组Cap蛋白,旨在探索病毒样颗粒(VLPs)的形成及其免疫原性。以pCAGGS为表达载体构建了重组质粒pCAGGS-Cap-Flag,瞬时转染293T细胞,利用Flag标签对表达的Cap蛋白进行纯化。通过电镜观察重组Cap蛋白形成的VLPs形态表明,纯化的重组Cap蛋白以VLPs形式存在,其直径约17 nm,与自然PCV2病毒粒子一致。SDS-PAGE和Western-blot鉴定表明,重组Cap蛋白为28.7 ku,分子质量符合预期,它与PCV2特异性单抗具有良好的免疫活性反应。捕获ELISA检测显示,重组Cap蛋白所组装的VLPs与纯化的自然PCV2具有相似的抗原活性。用制备的VLPs与经典的PCV2灭活疫苗分别免疫小鼠,这两种疫苗均能诱导良好的PCV2抗体应答反应,VLPs免疫组小鼠的抗体效价最高可达1∶12 800,是PCV2灭活疫苗免疫组抗体效价的2倍。采用PCR检测免疫攻毒后小鼠肺组织中PCV2核酸,结果显示,VLPs免疫组和PCV2灭活疫苗免疫组均未检测到PCV2核酸,判定100%保护。本研究通过真核细胞表达系统制备的PCV2 VLPs具有与自然病毒粒子相似的形态结构,免疫小鼠可产生良好的免疫反应,可用于新型PCV2疫苗的研制。

• 单位
  中国农业科学院哈尔滨兽医研究所; 兽医生物技术国家重点实验室