模板质量对RT-PCR结果的影响及分析

作者：郭佳琦; 丁旭; 解宇浩; 张嘉琪; 狄文慧; 徐连秀; 聂文营; 郝峰^*

来源：吉林医药学院学报, 2020, 41(05): 340-342.

DOI：10.13845/j.cnki.issn1673-2995.2020.05.008

• RT-PCR
• 模板
• 蛋白质

目的探究模板质量对RT-PCR结果的影响及分析其影响因素。方法从大鼠甲状腺滤泡上皮细胞中提取总RNA进行逆转录,产物进行PCR、NanoDrop检测其质量。选用不同浓度PCR产物及加入不同浓度标准蛋白(BSA)进行PCR,并进行琼脂糖凝胶电泳。凝胶成像仪分析不同浓度蛋白质对PCR终产物量的影响,Image J软件对PCR产物定量分析。结果模板质量低时,模板量与PCR产物量成反比,且选取质量不佳的模板会产生非特异性条带;模板质量高时,模板量与PCR产物量成正比,且未见非特异性条带;模板受杂质污染(如蛋白质污染)时,在模板量相同情况下,蛋白浓度越高,PCR产物的量越低。结论模板质量严重影响RT-PCR结果,模板质量低时,应减少模板的量。

• 单位
  吉林医药学院