Smad4/DPC4基因小发夹RNA质粒表达载体的构建和鉴定

作者：季国忠; 张发明; 黄曙; 缪林; 刘政; 喻容彬; 王学浩

来源：医学研究生学报, 2006, 19(11): 973-975+979+1067.

DOI：10.3969/j.issn.1008-8199.2006.11.005

• RNA干扰
• Smad4
• 小发夹RNA
• 293细胞
• 肿瘤

目的:构建Smad4基因小发夹RNA(shRNA)表达载体。方法:设计、合成3对编码Smad4基因shRNA的寡核苷酸序列,并分别将其克隆入pGCsi-H1/Neo/GFP质粒,酶切、测序鉴定,脂质体法转染293细胞。实时荧光定量PCR检测RNA干扰(RNA i)的抑制效果。结果:在经HindⅢ和BamHⅠ双酶切分别鉴定三种重组载体后,DNA测序证实小干扰RNA(siRNA)序列正确,并被准确克隆入载体。实时荧光定量PCR检测结果表明三种重组载体psiSm ad4-1、psiSm ad4-2和psiSm ad4-3载体,分别对293细胞中Smad4基因mRNA表达的特异性抑制率为39.00%、8.80%和73.80%。结论:成功构建Sm ad 4 pGCsi-H1/Neo/GFP/shRNA质粒,为后期研究Smad4基因在肿瘤细胞中的作用机制和基因治疗打下基础。

• 单位
  第四军医大学; 南京医科大学第一附属医院; 西京医院; 南京医科大学第二附属医院