透明质酸修饰纳米粒在超声-微泡介导下的体外靶向性与安全性评价

作者：陶宏宇; 朱珊; 孙楠; 张芙蓉; 王晨雨; 王文^*

来源：宁夏医科大学学报, 2023, 45(08): 784-791.

DOI：10.16050/j.cnki.issn1674-6309.2023.08.005

• 纳米粒核酸递送载体
• siRNA
• 透明质酸
• 超声-微泡

目的 制备一种由透明质酸修饰的纳米粒核酸递送载体(HDP@siRNA NPs)，评价其生物安全性以及在超声-微泡介导下的体外转染靶向性。方法 采用超声乳化溶剂挥发联合两步静电吸附法制备得到HDP@siR-NA NPs，在透射电镜下观察其外观形态，测定其粒径、Zeta表面电位及体外稳定性，并检测siRNA的包封率及体外释放能力。荧光显微镜观察超声-微泡介导下纳米粒对肿瘤细胞的转染效果。通过CCK-8实验以及小鼠定期给药后的血清生化指标[肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)、肝脏的丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转移酶(AST)、肾脏的血清肌酐(CREA)、尿素氮(BUN)]检测及主要器官(心、肝、脾、肺、肾)病理切片分析验证纳米粒体内外生物安全性。结果 成功制备出HDP@siRNA NPs，其在透射电镜下为形态均一的三层球形结构，粒径为(154.71±2.91)nm,Zeta表面电位为(-14.12±1.67)mV，并可长期稳定保存。该纳米粒载体对siRNA的包封率为(77.05±2.28)%，体外释放实验显示其具有缓释效果。靶向纳米粒联合超声-微泡组转染细胞后，Cy3荧光强度量化值为单独siRNA组的3.98倍(P<0.001)，为非靶向NPs组的1.71倍(P<0.001)，为靶向NPs组的1.39倍(P<0.001)。CCK-8结果显示，共孵育siRNA浓度为100 nmol·L-1及150 nmol·L-1时，HDP@siRNA NPs组细胞存活率依然维持在较高水平，并高于DP@siRNA NPs组(P<0.001)，同时加入SonoVue共孵育对细胞存活率未产生明显影响(P>0.05)。对健康小鼠定期注射纳米粒及SonoVue微泡期间，给药结束后的血清生化检测结果显示，三组小鼠心、肾、肝功能基本指标水平差异均无统计学意义(P均>0.05)，心、肾、肝未见异常损害情况。结论 成功制备的由透明质酸修饰的HDP@siRNA NPs具有较高的生物安全性，在超声-微泡介导下其转染细胞效率得到进一步提升，具备作为新型核酸递送载体的潜力。

• 单位
  宁夏医科大学; 宁夏医科大学总医院