昆虫细胞中表达eGFP基因的重组杆状病毒的构建

作者：唐晓艳; 高冬妮; 李梅; 葛菁萍; 平文祥; 楼庄伟

来源：中国农学通报, 2013, (08): 26-30.

• 昆虫杆状病毒表达系统
• 增强型绿色荧光蛋白
• 昆虫细胞 baculovirus expression system
• enhanced Green Fluorescent Protein (eGFP)
• insect cells

为构建表达增强型绿色荧光蛋白(eGFP)融合蛋白的昆虫杆状病毒转移载体。利用Sf-9细胞表达eGFP,用PCR法从重组Bacmid和pEGFP-C3质粒中扩增gp64SP、eGFP和VSVGED片段,利用一步法SOE-PCR将3个片段连接在一起。用XbaI和HindIII酶切融合片段与pFastBacPH,连接获得阳性质粒命名为pFB/LM-PH。转化E.coliDH10Bac,通过转座子Tn7的介导,获得重组杆状病毒Bv-LM-PH,感染Sf9昆虫细胞。结果表明:通过倒置荧光显微镜观察细胞形态及荧光表达情况;结果证实:感染的Sf9细胞可表达外源基因eGFP。重组pFB/LM-PH载体具备表达...

• 单位
  黑龙江大学