应用实时荧光PCR技术检测构巢曲霉的初步研究

作者：刘金华; 贺丹; 史艳宇; 张宇; 王丽

来源：中国生物工程杂志, 2008, (10): 95-99.

DOI：10.13523/j.cb.20081019

• 构巢曲霉
• 实时荧光PCR
• 检测

目的:根据构巢曲霉(Aspergillus nidulans)3-磷酸甘油醛脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)基因特异位点设计并合成Taqman探针及引物,建立构巢曲霉实时荧光PCR检测方法。方法:应用lasergene7.1软件对构巢曲霉与13种常见曲霉主要包括黑曲霉(A.niger)、烟曲霉(A.fumigatus)、杂色曲霉(A.versicolor)、土曲霉(A.terrus)、黄曲霉(A.flavus)、温特曲霉(A.wentii)、寄生曲霉(A.parasiticus)、泡盛曲霉(A.awamori)、米曲霉(A.oryzae)、棒曲霉(A.cavatus)、赤曲霉(A.ruber)、亮白曲霉(A.ochraceus)及赭曲霉(A.ochraceus)进行GAPDH基因序列比对分析,在特异位点设计引物和探针,建立构巢曲霉实时荧光PCR检测方法,并对该方法进行特异性及敏感性分析。结果:用曲霉属22种41株不同曲霉及其他属的12株病原真菌验证实验表明,所建立的荧光PCR方法特异性强;检测灵敏度可达4.03×10-12μg/ml的模板DNA。结论:应用实时荧光PCR技术能够有效检测构巢曲霉,该方法具有特异、灵敏、快速等特点,可在实际工作中应用。

• 单位
  吉林大学; 基础医学院; 吉林出入境检验检疫局