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摘要
为给后续牛传染性鼻气管炎病毒（infectious bovine rhinotracheitis virus,IBRV）单克隆抗体制备、酶联免疫吸附试验等研究提供基础，采用PCR技术扩增IBRV gB基因主要抗原区序列（312～529 aa位置），构建原核重组表达质粒pET-32a-gB，将其转化至BL21(DE3)感受态细胞进行诱导表达，通过对蛋白表达形式确认并对诱导剂（IPTG）浓度、诱导表达时间及诱导温度优化，表达并纯化获得gB重组蛋白，并对重组蛋白进行反应原性鉴定。结果显示：gB重组蛋白主要以包涵体形式表达，IPTG最佳诱导浓度为1 mmol/L，最佳诱导表达时间为6 h，最佳诱导温度为37℃；重组蛋白相对分子质量约60 ku，纯化后蛋白质量浓度为1.02 mg/mL;Western-blot鉴定发现，gB重组蛋白能被IBRV阳性血清特异性识别。结果表明，成功对IBRV gB基因进行体外原核表达与鉴定，为后期开展相应单克隆抗体制备等研究奠定了基础。
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单位中国动物卫生与流行病学中心; 动物科学学院; 塔里木大学
