荧光重组酶聚合酶扩增技术快速检测甲型肝炎病毒

作者：孙栋良; 杨栋; 金敏; 周树青; 姜瀚集; 李君文^*; 尹静^*

来源：解放军预防医学杂志, 2020, 38(10): 51-53.

DOI：10.13704/j.cnki.jyyx.2020.10.018

• 甲型肝炎病毒
• 重组酶聚合酶扩增
• 快速检测

目的建立基于荧光重组酶聚合酶扩增(RPA)技术的甲型肝炎病毒快速检测方法。方法设计针对甲型肝炎病毒特异性保守序列的RPA引物和探针,利用TwistAmp? exo检测试剂盒建立荧光RPA扩增体系,对引物扩增效率、特异性、灵敏性进行评价。结果本研究通过设计甲型肝炎病毒异性片段的RPA引物、探针,建立了基于荧光RPA技术的甲型肝炎病毒快速检测方法。引物筛选实验表明,荧光RPA反应4 min时即可检测到起峰的曲线,扩增的目的片段长度为200 bp。特异性实验结果表明:本研究建立的RPA检测方法能够特异性地扩增甲型肝炎病毒基因组,不能扩增戊型肝炎病毒、诺如病毒、星状病毒基因组。灵敏性实验结果表明:本研究建立的RPA检测方法能够检测到低至15.6 copies/μL的甲型肝炎病毒。结论本文建立的荧光RPA检测方法特异性强、灵敏性高、稳定性好以及可操作性强,可用于对甲型肝炎病毒的检测。