枇杷悬浮细胞AS基因的瞬时表达载体构建与亚细胞定位

作者：李惠华^*; 曾碧玉; 王伟; 常强; 苏明华

来源：农业生物技术学报, 2019, 27(11): 1923-1932.

• 香树素合成酶(AS)
• 枇杷
• 悬浮细胞
• 瞬时表达
• 亚细胞定位

枇杷(Eriobotrya japonica)细胞悬浮培养可以产生丰富的五环三萜类化合物。香树素合成酶(amyrine synthase, AS)是三萜合成途径中的关键酶,决定主要代谢和次生代谢的分支点。枇杷AS基因的功能未见报道。本研究以AS基因过表达质粒(p DONR207-AS)为模板,经PCR扩增获得AS基因的正向开放阅读框,经酶切及与载体的连接,成功构建表达载体p BWA(V)HS-AS-GFP-Tnos。以枇杷悬浮细胞(AS分离的同源系统)为受体材料,在农杆菌(Agrobacterium tumefaciens) GV3101的介导下进行瞬时表达,通过共转化的GFP在激光共聚焦显微镜下成像,分析AS蛋白的亚细胞定位;采用气相色谱-质谱联合分析AS催化产物。研究结果显示,AS在枇杷悬浮细胞中定位于内质网;枇杷悬浮细胞中AS的催化产物含α-香树素和β-香树素,AS属于多功能酶。本研究可为明确五环三萜类化合物合成途径以及枇杷悬浮细胞的转基因应用提供参考依据。

• 单位
  福建省亚热带植物研究所