细胞FLICE样抑制蛋白通过抑制程序性坏死减轻心肌缺血-再灌注损伤

作者：刘滴; 吴辉^*; 杨俊; 杨简; 丁家望; 张静; 李云曌; 周刚; 张栋

来源：中华急诊医学杂志, 2022, 31(03): 349-355.

DOI：10.3760/cma.j.issn.1671-0282.2022.03.016

• 急性心肌梗死
• 心肌缺血再灌注损伤
• 程序性坏死
• 细胞FLICE样抑制蛋白

目的基于RIPK1/RIPK3/MLKL介导的程序性坏死途径, 探讨细胞FLICE样抑制蛋白(cellular FLICE-like inhibitory protein, cFLIP)对心肌缺血再灌注损伤的调节作用。方法通过缺氧4 h/复氧12 h构建心肌细胞缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation, H/R)模型, 通过结扎左前降支30 min/再灌注3 h构建大鼠心肌缺血-再灌注(ischemia reperfusion, I/R)模型, 使用CCK-8检测各组心肌细胞活力, 使用DAPI/PI双染色检测各组心肌细胞坏死率变化, 使用STRING数据库预测cFLIP的蛋白互相作用网络, 使用TTC染色检测各组大鼠心肌梗死面积, 使用Western Blot检测cFLIPL、cFLIPS、p-RIPK1、p-RIPK3以及p-MLKL的蛋白表达或活化水平。结果在心肌细胞H/R损伤和心肌组织I/R损伤过程中, cFLIPL和cFLIPS的蛋白表达均被显著下调, 而程序性坏死的相关蛋白RIPK1、RIPK3以及MLKL的磷酸化水平均显著上升。上调cFLIP的蛋白表达可明显地减轻心肌细胞H/R损伤、降低H/R诱导的细胞坏死率并缩小I/R导致的心肌梗死面积。STRING数据库结果显示cFLIP与RIPK1和RIPK3存在直接蛋白相互作用, 在心肌细胞H/R损伤模型和心肌组织I/R模型中过表达cFLIP均可显著抑制了RIPK1、RIPK3以及MLKL的磷酸化水平。结论过表达cFLIP可显著抑制RIPK1/RIPK3/MLKL介导程序性坏死发生, 从而减轻心肌细胞损伤并缩小心肌梗死面积。

• 单位
  三峡大学; 宜昌市中心人民医院