菊粉外切酶的异源表达、纯化及酶学性质

作者：马俊; 安启坤; 唐文竹^*

来源：食品与发酵工业, 2019, 45(04): 25-30.

DOI：10.13995/j.cnki.11-1802/ts.018537

• 类芽孢杆菌
• 菊粉外切酶
• 克隆
• 酶学性质

将菊粉降解菌Paenibacillus sp. Lfos16的菊粉外切酶基因克隆至表达载体p ET-28a (+),转入Escherichia. coli BL21(DE3)中实现了异源表达。利用镍柱亲和层析纯化重组菊粉外切酶,并进行SDS-PAGE检测。重组菊粉外切酶的表观分子质量为87 k Da,经纯化后,重组菊粉外切酶的比酶活为348.30 U/mg。重组菊粉外切酶作用菊粉和蔗糖的酶活分别为259.37 U/m L和592.16 U/m L,I/S值为0.438,且重组酶水解菊粉的主要产物为果糖。重组菊粉外切酶最适作用温度为40℃,且当温度低于30℃时酶活较稳定;最适作用pH为6。Ag+、Cu2+、Mn2+、Zn2+、Hg2+、Fe3+具有显著抑制作用。重组菊粉外切酶对菊粉的Km为19. 28 mg/m L,Vmax为0.18 mg/(min·m L)。

• 单位
  大连工业大学; 生物工程学院