锚定多重PCR技术的建立及其在核酸相对分子质量标准制备中的应用

作者：严瑞芬; 屈武斌; 吴永红; 刘虎岐; 张成岗

来源：军事医学科学院院刊, 2010, (06): 516-518+522.

• 锚定
• 多重PCR
• 核酸扩增技术
• 相对分子质量标准
• 大肠杆菌
• 敏感性与特异性 anchorage
• multiplex PCR
• nucleic acid amplification techniques
• relative molecular mass standards
• Escherichia coli
• sensitivity and specificity

目的利用5'端锚定引物及多重聚合酶链反应(PCR)技术建立高效、特异性扩增核酸片段的方法,并探讨其在核酸相对分子质量(Mr)标准(DNA标志物)制备中的应用。方法针对常用的pMD19-T载体(2692 bp)序列,利用命令行程序pd4marker.py,结合Primer3及多因素引物特异性评估软件MFEprimer,设计5'端锚定的上游引物和7对扩增不同目的片段的下游引物;其次,以转化有pMD19-T载体的大肠杆菌DH5α菌液为模板,分别进行一至七重PCR扩增;并将扩增产物经2%琼脂糖凝胶分离及凝胶成像仪采集图像分析;最后,评估该方法在核酸Mr标准制备中的应用。结果制备了特异性较好的一至七重P...

• 单位
  军事医学科学院放射与辐射医学研究所; 西北农林科技大学; 生命科学学院; 蛋白质组学国家重点实验室