靶向调控Claudin-4基因表达介导DNA损伤修复增强膀胱癌细胞化疗敏感性的研究

作者：艾克帕尔·阿布拉江; 崔涛; 杜恒^*

来源：局解手术学杂志, 2023, 32(04): 279-285.

• 膀胱癌
• 紧密连接蛋白4
• 顺铂
• 化疗敏感性
• DNA损伤修复

目的 探究靶向下调紧密连接蛋白4(Claudin-4)基因表达对膀胱癌细胞DNA损伤修复及其化疗敏感性的影响。方法 采用si-Claudin-4及阴性对照(si-NC)转染人膀胱癌细胞系EJ下调Claudin-4的表达，采用qRT-PCR和Western blot检测细胞Claudin-4的表达，以确定转染效果。不同浓度顺铂（DDP）处理转染后的EJ细胞，CCK-8法检测细胞存活率。将EJ细胞随机分为对照组、si-Claudin-4组、DDP组、DDP+si-Claudin-4组。经转染处理与DDP处理后，CCK-8法检测各组细胞存活率；平板克隆形成实验检测各组细胞克隆形成能力；细胞免疫荧光染色观察各组细胞内γ-H2AX焦点生成情况；单细胞凝胶电泳法检测各组细胞DNA损伤情况；Western blot检测各组细胞内γ-H2AX、Ku70、Ku80以及DNA-PKcs的蛋白表达水平。结果 细胞转染后，si-Claudin-4组细胞内Claudin-4 mRNA和蛋白相对表达量均显著低于对照组和si-NC组（P<0.05）。经不同浓度DDP处理后，si-Claudin-4组EJ细胞存活率显著低于对照组和si-NC组（P<0.05）。与对照组比较，si-Claudin-4组和DDP组细胞存活率显著下降，细胞克隆形成数目显著减少，细胞内γ-H2AX焦点形成显著增加，细胞出现典型拖尾形状，彗星尾长和尾部DNA比例均显著增加，γ-H2AX蛋白相对表达量显著上调，Ku70、Ku80及DNA-PKcs的蛋白相对表达量显著下调，差异均具有统计学意义（P<0.05）；与DDP组比较，DDP+si-Claudin-4组细胞存活率显著下降，细胞克隆形成数目显著减少，细胞内γ-H2AX焦点形成显著增加，细胞拖尾现象更加明显，细胞彗星尾长和尾部DNA比例均进一步增加，同时，γ-H2AX蛋白相对表达量显著上调，且Ku70、Ku80、DNA-PKcs的蛋白相对表达量均显著下调，差异均具有统计学意义（P<0.05）。结论 在膀胱癌细胞系EJ中靶向下调Claudin-4基因表达，能够增强肿瘤细胞对DDP的敏感性，该作用可能是通过抑制DNA损伤修复能力实现的。

• 单位
  新疆医科大学第二附属医院