构建环状RNA mmu＿circ＿Rab11a质粒载体并转染293T细胞

作者：元佩燕; 陈蕾; 徐帅妹; 童方丽; 徐平平^*

来源：中国组织工程研究, 2019, 23(33): 5372-5377.

• 环状RNA
• mmu＿circ＿Rab11a
• 载体构建
• 293T细胞
• 脂质体转染
• 过表达载体
• MC3T3细胞
• 细胞增殖

背景:研究发现Rab11a在细胞自噬、增殖过程中发挥重要作用。由于circ RNA可通过调控亲本基因的表达参与生物学过程的调控,因此,mmucircRab11a是否同样在细胞自噬、增殖过程中发挥重要作用值得关注。目的:探讨环状RNA mmucircRab11a质粒载体构建并转染293T细胞的可行性。方法:构建PLC5+mmucircRab11a过表达质粒载体,采用PCR、基因测序等方法对重组质粒进行验证鉴定。利用脂质体Lipofectamine3000转染试剂将mmucircRab11a过表达载体瞬时转染至293T细胞中。利用RT-PCR检测对照组、空载组(p LC5-ciR)及mmucircRab11a过表达组中mmucircRab11a的基因表达情况并对PCR产物进行Sanger测序验证。mmucircRab11a过表达质粒载体转染MC3T3,CCK8检测细胞增殖能力。结果与结论:实验成功构建了mmuCircRab11a过表达载体,可促使293T细胞高效转染mmucircRab11a。过表达mmucircRab11a可提高MC3T3细胞的增殖能力。提示可利用基因工程技术构建mmucircRab11a过表达载体,通过脂质体法转染法转染293T细胞,使其高效转录mmucircRab11a,为进一步研究mmucircRab11a的生物功能奠定实验基础。可通过调控mmucircRab11a的表达影响MC3T3细胞的增殖能力。

• 单位
  南方医科大学口腔医院