白纹伊蚊唾液腺serpin1基因的可变剪接分析与原核表达

作者：程金芝; 孙宇; 陈璐; 刘鉴; 吴家红

来源：中国人兽共患病学报, 2014, 30(05): 473-478.

• 丝氨酸蛋白酶抑制剂
• 可变剪接子
• 克隆表达
• 白纹伊蚊

目的克隆并原核表达白纹伊蚊唾液腺丝氨酸蛋白酶抑制剂基因1(Aalbserpin-1)。方法根据NCBI网站上白纹伊蚊Aalbserpin-1(AY826096.1)的序列设计引物,用RT-PCR从白纹伊蚊广州株中获取Aalbserpin-1全长基因序列,并进行生物信息学分析。将目的片段克隆到原核表达载体pET28a(+),转化到大肠杆菌中诱导表达。利用实时荧光定量RTPCR分析Aalbserpin-12基因在白纹伊蚊不同组织中的表达差异。结果 PCR扩增获得Aalbserpin-1基因两个转录本(Aalbserpin11和Aalbserpin12),Aalbserpin11的基因序列为1 260bp,编码419个氨基酸;Aalbserpin12的基因序列为1 332bp,编码443个氨基酸,均具有seprin结构域,Aalbserpin11和Aalbserpin12与Aalbserpin-1(AY826096.1)相比,相似性分别为95%和90%。两个转录本比较,Aalbserpin12中含有24个氨基酸的可变剪接子正好位于其功能活性中心环(RCL)上。以Aalbserpin12序列为模板,成功构建pET28a-Aalbserpin-12重组质粒。SDS-PAGE结果显示目的基因在Origami(DE3)中表达,重组蛋白相对分子量(Mr)约为50 000Da,经亲和层析获得目的蛋白。组织表达谱显示Aalbserpin-12在唾液腺(SG)、中肠(MG,P>0.05)丰富表达,脂肪体低表达(FB,P<0.05)。结论白纹伊蚊广州株Aalbserpin-1基因具有两个可变剪接子,其中Aalbserpin-12在唾液腺、中肠丰富表达,成功构建pET28a-Aalbserpin-12重组质粒并获得重组蛋白。

• 单位
  贵州医科大学; 贵阳医学院附属医院