人胰岛素原基因胰外表达重组体的构建及鉴定

作者：袁凤山; 张坤; 杨立新; 王大会; 尤春暖

来源：中国医科大学学报, 2004, 33(04): 36-38.

DOI：10.3969/j.issn.0258-4646.2004.04.014

• 人胰岛素原基因
• 逆转录病毒载体
• 基因重组
• 基因表达

目的 :构建胰外表达成熟胰岛素的重组体。方法 :将人胰岛素原基因进行二处突变 ,突变后的胰岛素原基因与逆转录病毒载体 pLXSN重组并转染肝癌细胞。提取肝癌细胞基因组DNA ,PCR方法鉴定人胰岛素原基因与载体重组结果及在肝癌细胞基因组中整合情况。同时测定成熟胰岛素的表达。结果 :胰岛素原基因已整合到肝癌细胞基因组。突变的胰岛素原可被广泛存在的furin酶识别 ,在培养基内检测到较高浓度的成熟胰岛素。结论 :成功构建胰外表达成熟胰岛素的突变人胰岛素原基因逆转录病毒重组体。

• 单位
  辽宁沈阳; 中国医科大学附属第一医院