盐酸克伦特罗生物素化单链抗体在大肠埃希氏菌中的表达

作者：马巍娜; 刘雪林; 宋宏彬; 沈建良; 黄友章; 刘毅; 向丹

来源：现代检验医学杂志, 2016, 31(04): 44-50.

• 噬菌体表面展示技术
• 筛选
• 盐酸克伦特罗
• 生物素
• 表达

目的提取盐酸克伦特罗(CLB)生物素化抗体片段蛋白进行表达,为下一步纯化及农兽药品快速检测奠定基础。方法确定一株生物素化CLB噬菌体抗体"pHEN1-BHNS-CLB1"对其进行蛋白表达,即从噬菌粒"PHEN1-BHNS CLB1"切下scFv基因片段,亚克隆至能引导可溶性表达的载体pCANTAB5E上,完成了重组质粒的构建,将所构质粒转化大肠埃希氏菌感受态细胞BL21。命名"5E--BHNS-CLB1",并对"5E-BHNS-CLB1"进行PCR及酶切鉴定后,测序分析。结果ELISA结果证明其具有较好的亲和性,竞争抑制ELISA、与gP120蛋白及三聚氰胺的交叉反应ELISA结果均证明其具有很好的特异性,片段大小与预想目的片段大小一致,SDS-PAGE及Western b1otting的结果显示,其分子量大小与目的一致,并能与抗E-tag标签抗体结合显色。结论说明表达的蛋白能与表达载体5E后带有E-Tag标签的短肽作用,含有E-Tag标签,是我们要表达的目的蛋白,为下一步纯化蛋白创造了条件。

• 单位
  中国人民解放军海军总医院; 中国人民解放军军事医学科学院