Doxycycline诱导表达Msx2-GFP的鼠晶状体上皮Alpha-TN4细胞株的建立

作者：张娇; 于紫燕; 赵江月^*

来源：中国医科大学学报, 2019, 48(06): 499-506.

• Msx2
• Col3α1
• Tet-on系统
• 晶状体上皮细胞
• 诱导细胞株

目的利用基因开关调节系统(Tet-on),拟建立由doxycycline调控表达的Msx2诱导细胞株,经与SWISS-2DPAGE DATA比对,发现差异蛋白点。方法向鼠晶状体上皮细胞(Alpha-TN4)中稳定转染质粒Msx2-GFP-M2和TAP-GFP-M2,转染后的细胞经过G418筛选,挑出doxycycline诱导Msx2-GFP表达且具有较低背景的诱导细胞株M8,将空载体细胞株T9作为阴性对照细胞株。并对2组细胞行二维凝胶电泳(2-DE)及基因表达微阵列进行分析。结果从二维凝胶电泳图谱上获得蛋白质斑点。对照组T9检测到5 389个斑点,实验组M8检测到5 460个斑点。经与SWISS-2DPAGE DATA比对,发现差异蛋白点。经基因表达微阵列分析发现,与晶状体及白内障疾病相关的差异基因为Col3α1,并在RNA水平进行了验证。结论 Msx2基因过表达对Alpha-TN4蛋白质表达谱有影响,其中差异基因Col3α1与晶状体及白内障疾病相关。

• 单位
  中国医科大学附属第四医院; 中国医科大学