人类U5·116 ku蛋白基因片段的克隆

作者：洪敬欣; 邵洁; 史雪彬; 姚智; 杨洁

来源：天津医药, 2007, (06): 401-404.

DOI：10.3969/j.issn.0253-9896.2007.06.001

• HeLa细胞
• 基因表达
• 遗传载体
• 质粒
• 克隆,分子
• 逆转录聚合酶链反应
• 人类
• U5·116ku蛋白

目的:构建人类U5·116 ku基因全长真核表达质粒。方法:从HeLa细胞中提取总体RNA,一步法合成单链cDNA,利用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法,扩增出人类U5·116 ku基因两段连续的序列,首先分别克隆至pTZ57R/T载体,两段序列连接成全长后再定向克隆至真核表达载体pcDNA3.1(-),构建pcDNA3.1(-)-U5·116 ku重组质粒。结果:RT-PCR法获得U5·116 ku基因两段连续的序列,长度分别为1672bp和1246bp,分别与pTZ57R/T载体连接后,选择合适的酶切位点再连接成全长序列,然后将全长序列和pcDNA3.1(-)真核表达载体进行连接、转化、酶切鉴定及序列分析后,证实pcDNA3.1(-)-U5·116 ku重组质粒构建成功。结论:成功克隆了人类U5·116 ku的编码基因,并构建了其真核表达质粒pcDNA3.1(-)-U5·116 ku。

• 单位
  天津医科大学