奶山羊p27基因克隆分析及其对乳腺上皮细胞增殖的影响

作者：岳子婷; 黄江涛; 宁勇; 宗学阳; 张华文; 史怀平^*

来源：陕西师范大学学报(自然科学版), 2022, 50(05): 81-89.

DOI：10.15983/j.cnki.jsnu.2022021

• 奶山羊
• p27基因
• 克隆
• 细胞增殖

细胞周期依赖性激酶抑制蛋白B(cyclin dependent kinase inhibitors B, CDKNIB,即p27)可以抑制细胞周期蛋白-细胞周期蛋白依赖性激酶复合物，阻滞细胞周期进程。通过克隆获得奶山羊p27基因序列并阐明其编码蛋白的生物学特性，利用RNAi干扰技术和基因过表达技术沉默和上调奶山羊乳腺上皮细胞中p27基因的表达，以探究p27基因对乳腺上皮细胞增殖的影响。以西农萨能奶山羊乳腺组织为实验材料，扩增并克隆出奶山羊p27基因CDS全长序列，其全长597 bp,编码198个氨基酸。对p27基因编码蛋白进行生物信息学分析，发现其为亲水性不稳定蛋白，无跨膜结构。利用实时荧光定量PCR检测奶山羊p27基因mRNA在不同时期乳腺组织中的表达情况，发现p27基因在泌乳期的表达量高于干奶期。将构建的p27基因真核表达质粒转染奶山羊乳腺上皮细胞，使用CCK-8、Edu染色及蛋白质印迹法(Western blot)检测p27基因对乳腺上皮细胞增殖的影响，发现过表达p27基因抑制了乳腺上皮细胞的增殖和DNA合成，并使得CDK2蛋白表达水平升高(P<0.05)。上述结果提示p27可作为负调节因子参与乳腺上皮细胞增殖，研究结果为p27调控乳腺发育的分子机理提供了基础资料。

• 单位
  西北农林科技大学; 动物科技学院