白花丹醌对白血病细胞去甲基化作用的实验研究及生物信息学分析

作者：徐凯红; 杨澍均; 张怡; 严笑; 欧阳桂芳

来源：中华中医药学刊, 2022, 40(12): 226-311.

DOI：10.13193/j.issn.1673-7717.2022.12.047

• 白花丹醌
• DNA甲基化
• 白血病细胞
• 甲基化芯片

目的 探讨中草药提取物白花丹醌对人白血病细胞系HL-60细胞去甲基化的影响，并定位主要的作用途径和关键基因。方法 白花丹醌0.8μmol/L作用于HL-60细胞不同时间，酶联免疫吸附(ELISA法)测定其甲基化水平；蛋白免疫印迹法测定DNA甲基转移酶：DNA甲基转移酶1(DNMT1),DNA甲基转移酶3a(DNMT3a)和DNA甲基转移酶3b(DNMT3b)相对于内参甘油醛-3-磷酸脱氢酶蛋白(GAPDH)的表达水平；应用Infinium 850K甲基化芯片筛选去甲基化作用的信号转导途径和关键基因。结果 和对照组比较，白花丹醌作用18 h后HL-60细胞甲基化水平显著下降[(1.56±0.24)ng比(2.39±0.4)ng,(P<0.05)];经白花丹醌作用后DNMT1蛋白/GAPDH,DNMT3b蛋白/GAPDH表达下调[(0.41±0.06)比(0.79±0.17),(0.43±0.09)比(0.74±0.16),均P<0.05],而DNMT3a相对蛋白表达水平在研究时间内差异无统计学意义。甲基化芯片分析显示NUP93、CACNB2和ATP6V1B1等去甲基化明显的基因参与哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路，丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路和癌症中的微小核糖核酸(MicroRNAs)信号通路，是基因调控网络的中心环节。结论 低浓度白花丹醌能够诱导白血病细胞去甲基化，这种作用与抑制DNMT1和DNMT3b蛋白的表达有关，甲基化芯片技术对作用途径和关键环节进行定位，为下一步的研究确定了方向。

• 单位
  宁波市第一医院