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摘要
建立鸡柔嫩艾美耳球虫特异性抗体的ELISA检测方法,为柔嫩艾美耳球虫的免疫机制研究和口服卵黄抗体制剂研发奠定基础。以柔嫩艾美耳球虫的孢子化卵囊免疫雏鸡制备阳性血清和可溶性抗原,优化ELISA检测条件,以阴性血清确定检测临界值,以阳性抗体绘制标准曲线。结果表明,经过优化,确定包被缓冲液为0.05 mol/L碳酸盐缓冲液(pH值9.6),可溶性抗原的包被质量浓度为21.46μg/mL,4℃包被16 h;3%BSA 37℃封闭2h;待检血清和兔抗鸡IgG-HRP的最佳稀释倍数分别为20倍和500倍,阴性和阳性结果判定的临界OD450值分别为0.127 5和0.121 0,建立的标准曲线线性关系良好(R2=0.992 1)。该方法的建立可为相应试剂盒的研发提供技术基础,并可促进鸡球虫抗体免疫应答研究和有效防控。
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